如何进行植物体内游离脯氨酸含量测定

植物体内游离脯氨酸的测定主要有以下几个步骤:

1. 样品准备。收集植物叶片或其他组织样品,清洗后在室温下风干,制成粉末状,过40目筛筛选均匀粉末作为测定样品。

2. 蛋白质抽提。称取0.5-1g粉末样品,添加5-10ml锚氨酸缓冲液,在冰浴条件下匀浆,4000rpm离心10min。取上清液作为蛋白抽提液。

3. 蛋白定量。取蛋白抽提液适量,使用Coomassie Brilliant Blue G-250比色法测定蛋白含量。

4. 脯氨酸定量反应。取0.5ml蛋白抽提液,加入1ml七氟丙烷酸和2ml醇糊液,混匀后在70°C水浴中加热1h,冷却后测定410nm的光吸收度以计算游离脯氨酸的含量。

5. 标准曲线制作。以L-脯氨酸为标准品,配制系列不同浓度的标准溶液,进行脯氨酸定量反应,绘制标准曲线,用于样品中脯氨酸含量的计算。

6. 结果计算。根据样品蛋白定量结果计算蛋白浓度,再根据脯氨酸定量反应的吸光度计算脯氨酸浓度,最后以μmol/g FW或mg/g FW表示植物样品中游离脯氨酸的含量。

7. 重复实验。每种样品最好做3次平行实验,结果以平均值±标准差表示,以提高结果的准确性。

以上是植物体内游离脯氨酸含量测定的详细步骤和方法,主要涉及样品准备、蛋白和游离脯氨酸的提取、定量以及结果计算等内容。需要注意实验操作的细致性和重复性,以获取准确的实验结果。