柱色谱所选择的洗脱剂为什么要先用非极性或弱极性的,然后再使用较强极性的洗？

柱色谱洗脱过程选择洗脱剂的极性顺序有以下几个考虑:

1. 避免SAMPLE分子的变性或降解。SAMPLE分子在色谱柱中的保留时间与其极性有关,如果首先使用极性太强的洗脱液,可能导致SAMPLE分子变性或降解,影响其在柱中的游离和保留,从而影响色谱分离效果。所以通常选择从非极性开始,逐渐增加极性,以保证SAMPLE的完整性。

2. 有利于层析的渐进性。遵循从低极性到高极性的顺序,可以让SAMPLE中的各组分逐渐从柱中游离出来,保证色谱峰的良好分离。如果首先使用极性过强的洗脱液,很多组分可能同时被洗脱出来,导致峰的重合和不良分离。

3. 方便洗脱曲线的绘制。采用由低极性向高极性变化的洗脱液,可以得到较为完整的洗脱曲线,方便观察各组分的洗脱行为和保留特性,有利于认知SAMPLE的组成。如果初期洗脱液极性过强,可能导致有些组分被完全洗脱,难以在洗脱曲线上显示,不利于SAMPLE的分析。

4. 可以根据需要控制洗脱力。通过选择不同极性的洗脱液,可以根据需要控制对SAMPLE的洗脱力,达到理想的分离效果。这需要从低极性开始,逐步提高,以实现对洗脱过程的精细控制。

所以,总之,选择从低极性到高极性的洗脱液顺序,可以最大限度地保证色谱分离的效果与质量,这是柱色谱洗脱剂选择的基本原则。逐步增加洗脱液的极性,可以达到良好的渐进性,并可根据分离需求实现理想的控制。