突变诱发器怎么用

突变诱发器是一种可用来快速生成特定点突变的工具。主要通过以下几步使用:

1. 设计引物。根据需要的点突变序列,设计引物。引物长度一般为20~50个碱基,3'端12~15个碱基配对目标DNA序列,5'端含有突变位点。

2. PCR扩增。使用设计的引物,进行PCR扩增。扩增反应一般使用高 fidelity DNA聚合酶。

3. DpnI酶消化。用DpnI酶去除模板DNA,仅留下新合成的PCR产物。

4. 缝合。将两条PCR产物用缝合酶(Ligase)进行缝合,即完成突变。

5. 转化效率提高。为提高突变转化细菌的效率,可采用以下措施:

(1)使用高效率的转化子宫 desk competent细菌;

(2)在37°C水浴10min,热激活细菌受体,提高接受新DNA的能力;

(3)使用质量更高、浓度更高的突变体DNA;

(4)采用电穿孔或磁穿孔等物理或化学方法刺激细菌,提高转化率。

6. 鉴定突变体。通过序列鉴定和蛋白质鉴定等手段鉴定获得的突变体。

希望以上答案能提供突变诱发器的使用方式,如有疑问欢迎再询问。